Las imágenes de células vivas de quinasas receptoras activadas por ligandos que están marcadas con una proteína fluorescente pueden proporcionar información valiosa sobre el mecanismo por el cual dicho receptor convierte la señal que percibe en la superficie celular en una respuesta celular. Este enfoque se ha utilizado para el análisis de varias quinasas similares a receptores de plantas de la clase de receptores repetidos ricos en leucina. Sin embargo, hasta el momento no se ha aplicado con éxito a la quinasa receptora del locus S ni a ningún otro miembro de la clase de RLK del dominio S.
Un documento reciente en Annals of Botany describe la expresión y la proyección de imagen de células vivas de versiones funcionales marcadas con FP del A. lirata variante SRKb en a. thaliana células epidérmicas del estigma. El etiquetado FP exitoso de SRK y su visualización en células epidérmicas vivas del estigma sugieren nuevos enfoques para el análisis futuro de la dinámica de los complejos de proteínas SRK y SRK-SCR. Por ejemplo, debería ser posible visualizar SRK de longitud completa etiquetada con cYFP junto con proteínas SCR etiquetadas con una etiqueta fluorescente diferente y, por lo tanto, determinar de manera concluyente si SRK se internaliza después de su interacción con su ligando SCR.
Rea, AC y Nasrallah, JB (2015) Imágenes in vivo de la quinasa del receptor del locus S, el determinante de la especificidad femenina de la autoincompatibilidad, en Arabidopsis thaliana transgénica autoincompatible. Annals of Botany, 24 de febrero de 2015 doi: 10.1093/aob/mcv008
La quinasa del receptor del locus S (SRK), que se expresa en las células epidérmicas del estigma, es responsable del reconocimiento y la inhibición del polen 'propio' en la respuesta de autoincompatibilidad (SI) de Brassicaceae. Se cree que la interacción específica de alelo de SRK con su ligando localizado en la cubierta del polen afín, la proteína rica en cisteína (SCR) del locus S, desencadena una cascada de señalización dentro de la célula epidérmica del estigma que conduce a la detención del polen "propio". en la superficie del estigma. Además del receptor SRK de señalización de longitud completa, las células epidérmicas del estigma expresan otras dos especies de proteínas SRK que carecen del dominio quinasa y cuyo papel en la respuesta SI no se comprende: una versión soluble del ectodominio SRK denominado eSRK y un ectodominio anclado a la membrana. formulario designado tSRK. El objetivo de este estudio fue describir la distribución subcelular de las diversas especies de proteínas SRK en las células epidérmicas del estigma como un preludio para visualizar la dinámica del receptor en respuesta a la unión de SCR.
La función Arabidopsis lirata La variante SRKb se marcó con la variante Citrine de la proteína fluorescente amarilla (cYFP) y se expresó en a. thaliana plantas de la accesión C24, que se había demostrado que exhibían una respuesta SI robusta tras la transformación con el par de genes SRKb-SCRb. Los transgenes utilizados en este estudio se diseñaron para la producción diferencial y la visualización de las tres especies de proteínas SRK en las células epidérmicas del estigma. Los estigmas transgénicos se analizaron mediante ensayos de polinización y microscopía confocal.
Los ensayos de polinización demostraron que las proteínas SRK marcadas con cYFP son funcionales y que la eSRK no es necesaria para SI. El análisis microscópico confocal de las proteínas SRK marcadas con cYFP en células epidérmicas vivas del estigma reveló la localización subcelular diferencial de las tres especies de proteínas SRK, pero no mostró evidencia de redistribución de estas proteínas posterior a la polinización incompatible.
